使用说明：

如发现RIPA有沉淀，请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。

根据使用量，取每1mL RIPA加入10uL PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，混匀备用（PMSF现用现加）。

1、样品前处理：

A.对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 uL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。

B.对于悬浮细胞：离心收集细胞，按照6孔板每孔细胞量加入150-250uL裂解液的比例加入裂解液，用手指轻弹悬浮细胞以充分裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。

C.对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250uL裂解液的比例加入裂解液(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量) 。用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

2、后处理：

将裂解后的样品10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting和免疫沉淀等操作。

注意事项：

本试剂为强烈型裂解液，可以提取核蛋白，但在提取核蛋白的同时，也会将基因组一并释放出来，若细胞量多会造成细胞裂解液粘稠：此时可以直接加     入 白上样缓冲液，煮沸再离心，离心后直接上样电泳；若想测定浓度，可加入少量 SDS（1%），煮沸后离心测浓度。本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白     由于含有去污剂，所以不适合使用Bradford 蛋白浓度测定试剂盒，请选择BCA法或者Lowry法检测蛋白浓度。

如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散粘稠状物，随后离心取上清用于后续实验。